분화 후 분석을 위해 바이오프린팅된 구조물을 실온에서 24시간 동안 PBS에 4% 파라포름알데히드(PFA; Avantor)를 첨가하여 고정했습니다. 고정 후, 잔류 PFA를 제거하기 위해 PBS로 세 번 세척한 다음, 실온에서 24시간 동안 PBS에 0.5% Triton X-100(Sigma-Aldrich)을 첨가한 10% 소혈청 알부민(BSA; Sigma-Aldrich) 용액에서 투과 및 차단 처리를 동시에 수행했습니다. 구조물을 PBS로 세 번 세척한 후, 미오신 중쇄 염색을 위해 eFluor 660에 접합된 MF20(1:200 희석, Invitrogen)을, 핵 염색을 위해 NucBlue(Thermo Fisher Scientific; 1mL당 2방울)를 첨가한 동일한 10% BSA + 0.5% Triton X-100 완충액에서 실온에서 1시간 동안 배양하여 면역염색을 수행했습니다. 이후 시료를 PBS로 세 번 세척하여 과도한 염색액을 제거했습니다. 모든 단계는 진탕기에서 수행하여 3D 구조 전체에 시약이 고르게 침투하고 분포되도록 했습니다.

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